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龙图腾网获悉南京大学申请的专利一种调控番茄生长发育的基因及敲除方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115851763B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-28发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211478214.0，技术领域涉及：C12N15/29；该发明授权一种调控番茄生长发育的基因及敲除方法和应用是由邵珠卿;曾桢设计研发完成，并于2022-11-23向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种调控番茄生长发育的基因及敲除方法和应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种调控番茄生长发育的基因及敲除方法和应用，它的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，通过对番茄中PHO2基因设计CRISPRCas9guideRNA并利用pCC载体构建敲除载体，利用组培和农杆菌侵染得到PHO2基因的敲除植株，通过Sanger法基因测序鉴定PHO2基因被敲除；本发明通过对基因SEQIDNO.2的敲除可以延长番茄生长周期并保持持续的开花结果能力。

本发明授权一种调控番茄生长发育的基因及敲除方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种调控番茄生长发育的基因的敲除方法，其特征在于，调控番茄生长发育的基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，该基因的敲除会导致番茄分生能力增强，延长番茄生长周期，并保持持续的开花结果能力，基于CRISPRCas9技术构建番茄的PHO2基因敲除载体，产生pho2基因突变体番茄植株，发现在pho2基因敲除番茄植株中出现了生长周期由野生型中4至5个月延长至14个月以上，并在此过程中，植株具有持续产生新的分枝的能力并呈现出多轮的开花和结果的表型，包括以下步骤： 步骤1，对番茄PHO2基因的CDS区进行gRNA设计，选取位于起始密码子下游500bp以内、On-Target分值高且脱靶率低的gRNA，合成其正反链的单链DNA序列； 步骤2，合成spacer：将合成的两条单链进行PCR得到双链产物spacer； 两条中的一条单链DNA序列gRNA1-F如下：CACCGGGGTCTTCGACTAAATCAG，gRNA1-R如下：AAACCTGATTTAGTCGAAGACCCC； 两条中的另一条单链DNA序列gRNA2-F如下：GATTGTTGGGGATTATGTAGTGAT，gRNA2-R如下：AAACATCACTACATAATCCCCAAC； 步骤3，将spacer与AtU6-26V4载体连接：使用Bbs1-HF内切酶对AtU6-26V4质粒进行酶切，用T4连接酶将spacer与酶切后的AtU6-26V4质粒连接；将连接产物转入大肠杆菌感受态DH5α，并在氨苄霉素抗性培养基中筛选单克隆进行摇菌，提取质粒后使用‘中间载体检测-F’引物进行Sanger测序，经过测序验证spacer与AtU6-26V4载体连接成功的质粒即为中间载体；将中间载体作为PCR底物，设计带有同源臂的引物‘SOSO-F’和‘SOSO-R’，进行PCR扩增gRNAscaffold_spacer区域； 中间载体检测-F引物如下：GAGCTCGGATCCACTAGTAA； SOSO-F引物如下：TATGACATGATTACGAATTCGAGCTCGGATCCACTAGTAA； SOSO-R引物如下：CTAATCTGGGGACCGAATTCGTGTGATGGATATCTGCAGA； 步骤4，将gRNAscaffold_spacer序列与pCC载体连接：使用EcoR1内切酶对pCC质粒进行酶切，使用In-FusionHDCloningKit将gRNAscaffold_spacer序列与PCC载体进行重组连接；将连接产物转入大肠杆菌感受态DH5α，并在盐酸壮观霉素抗性培养基中筛选单克隆进行摇菌，提取质粒后使用‘最终载体检测-F’引物进行Sanger测序；对经过测序验证gRNAscaffold_spacer与pCC载体连接成功的质粒即为CRISPRCas9最终载体； 最终载体检测-F引物如下：ATGCTTCCGGCTCGTATGTT。

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