南京启真基因工程有限公司牛冬获国家专利权
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龙图腾网获悉南京启真基因工程有限公司申请的专利构建HTT基因突变的亨廷顿舞蹈症模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115786395B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-28发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210996706.2,技术领域涉及:C12N15/85;该发明授权构建HTT基因突变的亨廷顿舞蹈症模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用是由牛冬;汪滔;马翔;王磊;程锐;方园;赵泽英;胡世芳设计研发完成,并于2022-08-19向国家知识产权局提交的专利申请。
本构建HTT基因突变的亨廷顿舞蹈症模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用在说明书摘要公布了:本发明公开了构建HTT基因突变的亨廷顿舞蹈症模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了一种制备重组猪细胞的方法,包括如下步骤:用命名为DNA分子甲的DNA分子取代猪细胞的染色体DNA中的目标区域,得到重组猪细胞;所述DNA分子甲为如下Ⅰ或Ⅱ:ⅠSEQIDNO:16中第1734‑2176位核苷酸所示的DNA分子;ⅡSEQIDNO:16中第1071‑2176位核苷酸所示的DNA分子;所述目标区域为SEQIDNO:9中第2001‑2236位核苷酸所示的DNA分子。利用重组猪细胞通过体细胞核移植动物克隆技术所制备的克隆猪可作为亨廷顿舞蹈症模型猪。本发明对于亨廷顿舞蹈症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明授权构建HTT基因突变的亨廷顿舞蹈症模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用在权利要求书中公布了:1.一种制备重组猪细胞的方法,包括如下步骤:用命名为DNA分子甲的DNA分子取代猪细胞的染色体DNA中的目标区域,得到重组猪细胞; 所述DNA分子甲为SEQIDNO:16中第1071-2176位核苷酸所示的DNA分子; 所述目标区域为SEQIDNO:9中第2001-2236位核苷酸所示的DNA分子; 用命名为DNA分子甲的DNA分子取代猪细胞的染色体DNA中的目标区域的实现方式为:将sgRNAHTT-gU3、sgRNAHTT-gD1、供体质粒和NCN蛋白共转染猪细胞;所述供体质粒中具有所述DNA分子甲;所述sgRNAHTT-gU3为sgRNA,其靶序列结合区如SEQIDNO:19中第3-22位核苷酸所示;所述sgRNAHTT-gD1为sgRNA,其靶序列结合区如SEQIDNO:20中第3-22位核苷酸所示;所述NCN蛋白如SEQIDNO:3所示; 所述NCN蛋白的制备方法包括如下步骤: 1将质粒pKG-GE4导入大肠杆菌BL21DE3,得到重组菌; 2采用液体培养基30℃培养所述重组菌,然后加入IPTG并25℃诱导培养,然后收集菌体; 3将收集的菌体进行菌体破碎,收集粗蛋白溶液; 4采用亲和层析从所述粗蛋白溶液中纯化具有His6标签的融合蛋白; 5采用具有His6标签的肠激酶酶切具有His6标签的融合蛋白,然后采用Ni-NTA树脂去除具有His6标签的蛋白,得到纯化的NCN蛋白; 所述质粒pKG-GE4中编码所述融合蛋白的基因如SEQIDNO:1中第5209-9852位的核苷酸所示。
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