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龙图腾网获悉南京师范大学申请的专利RPA-Cas12a检测系统及其在肝胰腺坏死病检测中的应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116064849B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-21发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210819822.7，技术领域涉及：C12Q1/689；该发明授权RPA-Cas12a检测系统及其在肝胰腺坏死病检测中的应用是由陈国祥;王佩;张幸;李昺之设计研发完成，并于2022-07-12向国家知识产权局提交的专利申请。

本RPA-Cas12a检测系统及其在肝胰腺坏死病检测中的应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种RPA‑Cas12a检测系统及其在肝胰腺坏死病检测中的应用，该系统包括Cas12a预混液和用于扩增RPA产物引物和试剂，Cas12a预混液包括ssDNA、Cas12a和crRNA；ssDNA为两端分别修饰有荧光基团FAM和猝灭基团BHQ1的单链DNA；crRNA为能引导Cas12a靶向识别AHPNDRPA产物的向导RNA序列。本发明将RPA高扩增性能与CRISPR‑Cas12a高特异性相结合构建了RPA‑CRISPR检测方法，其灵敏度高、稳定性好，为水产养殖业如对虾养殖、螃蟹养殖等提供了一种高灵敏度、高准确性、稳定性好的AHPND现场检测方法。

本发明授权RPA-Cas12a检测系统及其在肝胰腺坏死病检测中的应用在权利要求书中公布了：1.一种RPA-Cas12a检测系统在制备重要水产养殖传染病肝胰腺坏死病的快速、准确、稳定现场检测试剂中的应用；所述应用为：将Cas12a、ssDNA与crRNA孵育，然后向其中加入RPA产物，反应在20-48℃qPCR仪中持续80-100min，每分钟读取1次FAM荧光信号； 所述RPA-Cas12a检测系统，包括Cas12a预混液和用于扩增RPA产物的引物和试剂，所述Cas12a预混液包括ssDNA、Cas12a和crRNA；所述ssDNA为两端分别修饰有荧光基团FAM和猝灭基团BHQ1的单链DNA；所述crRNA为能引导Cas12a靶向识别AHPNDRPA产物的向导RNA序列；所述RPA产物为在反应体系中，分别添加正向引物RPA-F和反向引物RPA-R、ABuffer和待检测样品的DNA模板，最后加入BBuffer，混匀孵育形成；所述Abuffer提供的是RPA反应的缓冲条件，Bbuffer为醋酸镁； 所述ssDNA的序列为5’FAM-TTATT-3’BHQ1； 所述crRNA序列为UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUAUUUUGCUAUCCAAUAUUCCA； 所述RPA-F的序列为ATGAGCCAGATATTGAAAACATTTGGGAAC；所述RPA-R的序列为TAACTAAACCAATGTAATCATCTTTTGC； 所述待检测样品的DNA模板为含或者不含AHPND毒力基因pirB上一段区别于其他物种的保守序列的DNA模板； 所述Cas12a预混液包括终浓度为250nM-500nM的ssDNA、终浓度为30nM-100nM的Cas12a、1xNEBBuffer2.1、30-300nMcrRNA以及DEPC水。

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